Barvení (biologie)

Z Wikipedie, otevřené encyklopedie

Barvení je biochemická metoda, kterou se přidá k substrátu specifická barvící látka (barvivo) a slouží v biologii na prokázání výskytu (kvalifikaci) nebo množství (kvantifikaci) specifické látky ve zkoumané tkáni nebo v pletivu, nebo k obarvení celých struktur a objektů, které zlepšuje nebo umožňuje jejich pozorování optickým mikroskopem.

Obsah

[editovat] Barviva

abecedně:

  • en: Bismarck brown
  • karmín - barví jádra červeně, extrakt ze samiček červce nopálového (Coccus cacti), nepřebarvuje, dříve využíván v embryologických studiích pro barvení celých bloků tkání.
  • en: Coomassie blue
  • DAPI
  • eosin
  • en: Erie garnet = direct red 10
  • etidium bromid
  • fenolová červeň = phenol red
  • hematoxylin
  • en: Hoechst stains
  • en: Iodine
  • jádrová červeň = nuclear red = „Kerlechtrot“ - barví jádra červeně, v roztoku síranu hlinitého
  • Kongo červeň = Congo red = direct red 28 - barví amyloid červeně
  • krystalová violeť
  • kyselina pikrová (2,4,6-trinitrofenol) - barví cytoplazmu buněk a svaly žlutě
  • kyselý fuchsin - kolagenní vlákna červeně
  • malachitová zeleň
  • en: Methyl green
  • en: Methylene blue
  • neutrální červeň = Neutral red
  • nilská modř
  • en: Nile red = Nile blue oxazone - barví tukové kapénky červeně
  • olejová červeň = oil red O - barví tuk červeně
  • en: Rhodamine
  • safranin
  • saturnová červeň (sirius red F3B, direct red 80, F3B 200, C. I. No. 35780, CAS No. 2610-10-8) - azobarvivo, kolagenní vlákna červeně nebo barvení amyloidu
  • sirius red 4B = direct red 79 = L4B 200 - azobarvivo
  • šafrán - barví kolagen, extrakt z blizen šafránu setého
  • Weigertův železitý hematoxylin = Weigert's Iron Hematoxylin - barví chromatin v jádrech šedě nebo temně hnědě (modročerně až hnědočerně)

[editovat] Barvicí metody

[editovat] Hematoxylin + eosin

Plicní tkáň from emphysema patient barveno hematoxylinem a eosinem.
Plicní tkáň from emphysema patient barveno hematoxylinem a eosinem.

[editovat] Barvení mukopolysacharidů (PAS + alciánová modř + hematoxylin)

  1. odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilce
  2. kyselina jodistá 0,5 % 5 minut
  3. praní vodou 2-3 min, oplach destilovanou vodou
  4. Schiffovo reagens 20-30 min
  5. tekoucí voda 10 min., oplach destilovanou vodou
  6. alciánová modř (před použitím se doporučuje přefiltrovat) 1-2 hod.
  7. oplach vodou
  8. hematoxylin 5 min.
  9. praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3 (5 min.), xylen 4 (5 min.), montování

Výsledek:

  • neutrální mukopolysacharidy a glykogen - červeně
  • kyselé mukopolysacharidy - modrozeleně
  • jádra - modře hematoxylinem

[editovat] Barvení kolageních vláken (saturnová červeň + Weigertův železitý hematoxylin)

  1. odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.)
  2. důkladně proprat ve vodě
  3. Weigertův železitý hematoxylin (roztok A + roztok B 1 : 1) 5 min. nebo gallocyanin 24 hod.
  4. praní v tekoucí vodě 5-10 min.
  5. saturnová červeň 1-20 min. (10 ml 1 % roztoku saturnové červeně + 90 ml nasyceného roztoku kys. pikrové)
  6. několikrát oplach v absolutním alkoholu, xylen 3, xylen 4, montování

Výsledek:

  • kolagení vlákna - červeně
  • svalovina - žlutě (pouze pokud je v saturnové červeni také kyselina pikrová)
  • jádra - hematoxylinem

[editovat] Barvení elastických vláken (orcein + hematoxylin)

  1. odparafínování: xylen 1 (5 min.), xylen 2 (5 min.), alkohol 1 (5 min.), alkohol 2 (5 min.), oplach v destilované vodě
  2. orcein 6-8 hod. při teplotě 38-40 °C
  3. oplach destilovanou vodou
  4. oplach kyselým alkoholem 70 %
  5. praní ve vodě
  6. hematoxylin 5 min.
  7. praní 20 min., oplach destilovanou vodou, oplach absolutním alkoholem, xylen 3, xylen 4, montování

Výsledek:

  • elastická vlákna - červenohnědě (elastické vazivo (žluté vazy obratlů, vazy hrtanu), elastická chrupavka (ušní boltec, epiglottis))

[editovat] Giemsovo barvení

[editovat] Gramovo barvení

[editovat] Externí odkazy

Metody:

Barviva:

V jiných jazycích