# DNR išskyrimas

### Straipsnis iš Vikipedijos, laisvosios enciklopedijos.

Siūloma šį straipsnį, kategoriją ar skyrių jungti su DNR. (Aptarimas)

Žmogaus ir gyvūnų DNR molekuliniams genetiniams tyrimams galima išskirti iš:

- periferinio kraujo leukocitų; kraujo dėmių (Guthrie kortelės);
- choriono gaurelių;
- amniocitų;
- burnos epitelio ląstelių;
- parafininių biopsinių blokų;
- plauko su plauko folikulu; odos epitelio ląstelių; spermos (dažniausiai teismo medicinoje).

Nėra sunku išskirti ir augalų bei mikroorganimų DNR, jei tik turima pakankamai pradinės medžiagos.

DNR yra santykinai chemiškai inertiška molekulė, kadangi aktyvios bazės yra invertuotos į dvigubos spiralės vidų ir apsaugotos inertišku frosfatų ir deoksiribozės karkasu, sujungtu fosfodiesterine jungtimi. Tačiau DNR molekulė nėra atspari fizinėms jėgoms, ypač šoninėms bei hidrodinaminėms. Tirpale dvispiralė DNR yra atsitiktinai susivyniojusi į kamuoliuką, kurį sustiprina vandelnilinės jungtys tarp bazių ir elektrostatinis atstūmimas tarp neigiamai įkrautų fosfatinių grupių. Kuo ilgesnė DNR molekulė, tuo silpnesnės hidrodinaminės jėgos gali ją sufragmentuoti. Po standartinių DNR išskyrimo procedūrų dažniausiai gaunamos ~100-150 (200) kb ilgio DNR fragmentų mišinys. Jie tinka Sounthern'o analizei, PGR bei genominių bibliotekų kūrimui naudojant bakteriofagų vektorius. Fiziologinėmis sąlygomis dauguma DNR yra B formos (sukasi palei aikrodžio rodyklę, turi 10 bp (bazių porų) per vieną apsisukimą, apsisukimas lygus 3,4 nm).

## [taisyti] Principas

Trys pagrindiniai DNR išskyrimo etapai:

- Ląstelių ir branduolio lipidinės membranos suardymas trinant, ultragarsu ar detergentais (SDS – Natrio dodecil/lauryl sulfatas); IGEPAL/NONIDET.
- Viduląstelinių ir histoninių baltymų pašalinimas pridėjus proteinazę K ir juos precipituojant pridėjus natrio ar amonio acetato, arba taikant fenolio-chloroformo-(izoamilo alkoholio) išskyrimo etapą (susidaro dvifazis tirpalas: DNR (ir kt. druskos) ištirpsta vandeninėje fazėje, o baltymai lieka organinėje fazėje; žingsniai kartojami; gali būti naudojamas tirpalas 25:24:1).
- DNR precipitacija paveikus šaltu 96º etanoliu ar izopropanoliu (izopropilo alkoholiu) (DNR netirpsta alkoholyje ir iškrenta į nuosėdas; taip pat yra pašalinamos druskos)
  - Vėliau DNR kelis kartus perplaunama alkoholiu (70, 96º etanoliu)džiovinama ir užpilama TE buferiu (šarminis buferis) arba laikoma -20 ištirpinta etanolyje (DNR bankas).

Iš 20 ml veninio kraujo išsiskiria apie 250 mkg DNR (branduolinė + mitochondrinė).

Nukleorūgštys taisyti
Nukleobazės: Adeninas - Timinas - Uracilas - Guaninas - Citozinas - Purinas - Pirimidinas
Nukleozidai: Adenozinas - Uridinas - Guanozinas - Citidinas - Deoksiadenozinas - Timidinas - Deoksiguanozinas - Deoksicitidinas
Nukleotidai: AMP - UMP - GMP - CMP - ADP - UDP - GDP - CDP - ATP - UTP - GTP - CTP - cAMP - cGMP
Deoksinukleotidai: dAMP - dTMP - dUMP - dGMP - dCMP - dADP - dTDP - dUDP - dGDP - dCDP - dATP - dTTP - dUTP - dGTP - dCTP
Nukleorūgštys: DNR - RNR - iRNR - miRNR - rRNR - siRNR - tRNR - mtDNR - Oligonukleotidai

Rodomas puslapis "http://lt.wikipedia.org../../../d/n/r/DNR_i%C5%A1skyrimas_7f25.html"

Kategorijos: Kandidatai jungti | Nukleorūgštys | Genetika

##### Views

- Straipsnis
- Aptarimas
- Dabartinė versija

##### Paieška

##### Kitomis kalbomis

- English
- Français
- Bahasa Indonesia
- 中文