Transformo

El Vikipedio

Transformi ĉelon estas enĉeligi fremdan DNA-molekulon en prokariotan ĉelon dum transdoni per viruso fremdan genan materialon en eŭkariotan ĉelon, en esperanto nomiĝas « transfekto ».

Post enplasmidigo de DNA-fragmento en vehiklon, necesas enĉeligi la rekombinintan vehiklon en mikroorganismon por amplifi, purigi, aŭ esprimi la genon, kiun ĝi enhavas. Tiu integriĝo okazas per genetika transformo. La principo estas integri en bakterian (ĝenerale Escherichia coli) aŭ eŭkariotan (ekz. gisto) vehiklon, la rekombinintan vehiklon, tio estas, enhavanta eksterdevenan DNA-insertaĵon, havigita post klonado. Kiam rekombininta vehiklo integriĝas per genetika transformo en novan ĉelon, ili kapablas replikiĝi en ĝi aŭtonome. Ĝi replikas sian DNA-n, kaj konsekvence ankaŭ la DNA-insertaĵon, kiun ĝi enhavas ĉe la tranĉejaro.

[redaktu] Bakterioj-transformo

Por faciligi la eniĝon de DNA-molekuloj tra ĉelmuro kaj ĉelmembrano, la bakterioj troviĝantaj en eksponenciala kresko-fazo estas rompiĝemigitaj (ekz. per kalka kloro je 4°C). Dum tiu fazo, la bakteriaj ĉelmembranoj senĉese rearanĝiĝas kaj estas pli rompiĝemaj. Tiuj bakterioj tiel pretigitaj, nomitaj "kompetentajn bakteriojn", estas kontaktigitaj kun la solvaĵo kiun enhavas la enĉeligendajn DNA-konstruaĵojn. Poste, la ĉelmembrano estas portempe permeabligata (portempe mikroporoj formiĝas) ĉu per termika ŝoko, ĉu per elektra ŝoko (elektroporigo). Oni trapasigas elektran kurenton tra ĉeloj provokante poroj-formiĝadon en la ĉela membrano tra kiuj DNA povas penetri la ĉelon.

Pligrandigu

Ĉiaj kombinaĵoj eniras ĉelojn, ankaŭ la ne-dezirataj. Post la eniĝo, ties esprimiĝo donos al ĉeloj apartan fenotipon (kontraŭ-antibiotiko-rezistecon, koloron) kiu ebligas selekti ĉelojn kiuj trafe lasis eniri la taŭgan konstruaĵon. La bakterioj estas tiam ekkultivataj sur geloza medio enhavanta antibiotikon korespondanta al kontraŭ-antibiotiko-rezistiga geno portata de plasmido. Per apliko de tiu antibiotika selektiva premo, nur la bakterioj kiuj integris plasmidon povas disvolviĝi. La rekombininta plasmido sekve ekmultobliĝos en la ĉelo, amplifante per la sama evento, la enplasmidigitan DNA-sinsekvon.

[redaktu] Gistoj-transformo

Iam skribenda